Study of the scientific production of the antibacterial activity of the chemical compounds of the essential oil of Lippia sidoides / Estudo da produção científica da atividade antibacteriana dos componentes químicos do óleo essencial de Lippia sidoides

Lippia sidoides Cham. has widespread use in folk medicine because its essential oil (EO) presents great antibacterial properties. In Brazil, this plant has been introduced in governmental programs for herbal medicine, due to its recognized therapeutic activities. This promoted greater interest in the search for new molecules with antimicrobial activity in this EO which have been described by several authors. Thus, this work aimed to present a study of the scientific production of antibacterial activity of the chemical compounds from L. sidoides essential oil (LSEO). The inclusion criteria were articles which assessed the chemical components and antibacterial activity through the inhibition diameter, Minimum Inhibitory Concentration (MIC), and Minimal Bactericidal Concentration (MBC), published between 2000 and 2020. Of the 996 studies identified, 55 met the inclusion criteria. In descending order, the most frequently detected chemical components found in LSEO were: thymol, p-cymene, and caryophillene. Regarding to the origin, the results showed that the extraction of EO were carried out mainly in the Northeast (55.5%) and Southeast (19%) regions of Brazil; and the part of the plant most used for the production were the leaves. In addition, the essential oil showed strong antibacterial activity against most of the bacteria tested.(AU)

Lippia sidoides Cham. é amplamente utilizada na medicina popular devido às propriedades antibacterianas atribuídas ao seu óleo essencial (OE). No Brasil, esta planta tem sido introduzida em programas governamentais de fitoterapia, por causa de suas atividades terapêuticas. Isso promoveu um maior interesse na busca por novas moléculas com atividade antimicrobiana presentes neste óleo, as quais foram relatadas por diversos autores. Assim, este trabalho objetivou apresentar um estudo da produção científica da atividade antibacteriana dos compostos químicos do OE da L. sidoide. Para tanto, foram utilizados artigos que abordaram os componentes químicos e atividade antibacteriana por meio de dados de diâmetro de inibição, Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM), publicados entre 2000 e 2020. De um total de 996 estudos identificados, 55 preencheram os critérios de inclusão. Em ordem decrescente, os componentes químicos mais comumente encontrados no OE da L. sidoide foram: timol, p-cimeno e cariofileno. Com relação à origem, os resultados mostraram que a extração do OE foi realizada principalmente nas regiões Nordeste (55,5%) e Sudeste (19%) do Brasil; e a parte da planta mais utilizada para a produção foram as folhas. Além disso, o OE apresentou uma forte atividade antibacteriana contra a maioria das bactérias testadas. (AU)

Antimicrobial activity of essential oils from Lippia alba, Lippia sidoides, Cymbopogon citrates, Plectranthus amboinicus, and Cinnamomum zeylanicum against Mycobacterium tuberculosis / Atividade antimicrobiana de leos essenciais de Lippia alba, Lippia sidoides, Cymbopogon citrates, Plectranthus amboinicus, e Cinnamomum zeylanicum em Mycobacterium tuberculosis

ABSTRACT: The rise in cases of antibiotic-resistant Mycobacterium tuberculosis has become a major obstacle to the effective control of tuberculosis (TB) worldwide. Essential oils (EO) are complex mixtures that may contain between 20 and 60 components, with two or three major compounds at relatively high concentrations (20-70%) that are responsible for their pharmacological properties. The objective of this study was to assess the antimicrobial activity of the EOs, bushy lippia (Lippia alba), rosemary pepper (Lippia sidoides), lemon grass (Cymbopogon citratus), Mexican mint or Indian borage (Plectranthus amboinicus), and true cinnamon (Cinnamomum zeylanicum), against Mycobacterium tuberculosis H37Rv. Chemical characterization of the EOs was performed by gas chromatography coupled to mass spectrometry. The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined by the microdilution-based resazurin microtiter assay. Four EOs were able to inhibit the growth of M. tuberculosis, with MICs of 286.5±130.2μg/mL (C. zeylanicum), 299.5±117.2μg/mL (L. sidoides), 351.6±39.06μg/mL (P. amboinicus), and 1,250μg/mL (C. citratus). Only the EO of L. alba showed no antimycobacterial activity at the tested concentrations, with an MIC greater than 1,250µg/mL. Results of this study suggested that C. zeylanicum, L. sidoides, and P. amboinicus could be important sources of bactericidal compounds against M. tuberculosis and require further investigation. The activity against M. tuberculosis of these three EOs has not been reported previously. The results show the high potential of the tested antimycobacterial EOs, making them a promising alternative for TB treatment. This data also confirms the importance of bioprospecting studies for active substances with antimycobacterial activity, which are still scarce.

RESUMO: O aumento no número de casos de Mycobacterium tuberculosis resistentes tem se tornado um grande obstáculo no controle efetivo da tuberculose (TB) mundialmente. Os óleos essenciais (OE), que são misturas complexas que podem conter entre 20 a 60 componentes, apresentam dois ou três compostos principais, em concentrações relativamente elevadas, 20 a 70%, que são responsáveis pelas suas propriedades farmacológicas. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicobacteriana dos seguintes óleos essenciais (OEs) em Mycobacterium tuberculosis H37Rv: erva-cidreira (Lippia alba), alecrim-pimenta (Lippia sidoides), capim-limão (Cymbopogon citratus), orégano (Plectranthus amboinicus) e canela (Cinnamomum zeylanicum). A caracterização química dos OEs foi realizada por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi determinada pela técnica de microdiluição da resazurina. Quatro OEs foram capazes de inibir o crescimento de M. tuberculosis, com CIM de 286,5±130,2μg/mL (C. zeylanicum), 299,5±117,2μg/mL (L. sidoides), 351,6±39,06μg/mL (P. amboinicus) e 1250μg/mL (C. citratus). Somente o OE de L. alba não mostrou atividade antimicobacteriana nas conscentrações testadas, considerando CIM maiores que 1250µg/mL. Os resultados deste estudo sugerem que L. sidoides, C. zeylanicum e P. amboinicus podem ser fontes importantes de compostos bactericidas contra M. tuberculosis e prováveis candidatos a serem investigados. A atividade contra M. tuberculosis desses três OEs não foi relatada em estudos anteriores. Os resultados mostram o elevado potencial antimicobacteriano dos OEs analisados, fazendo deles uma alternativa promissora para o tratamento da TB. Os resultados obtidos demonstraram a importância de pesquisas para bioprospecção de substâncias ativas com ação antimicobacteriana, que ainda são escassas.

Lethal and sublethal effects of essential oil of Lippia sidoides (Verbenaceae) and monoterpenes on Chagas´ disease vector Rhodnius prolixus

The aim of this study was to identify the composition of the essential oil from leaves of Lippia sidoides (EOLS), a typical shrub commonly found in the dry northeast of Brazil, popularly known as “alecrim-pimenta”. Additionally, we investigated the nymphicidal, ovicidal, phagoinhibitory and excretion effects of EOLS, its major constituent thymol and its isomer carvacrol, on fourth instar nymphs and eggs of Rhodnius prolixus, the Chagas’ disease vector. The nymphicidal and ovicidal activity of thymol, carvacrol, and EOLS was assessed by tests using impregnated Petri dishes. The lethal concentration values (LC50) for EOLS, carvacrol, and thymol were 54.48, 32.98, and 9.38 mg/cm2, respectively. The ovicidal test showed that both carvacrol and thymol (50 mg/cm2) inhibited hatching (50% and 23.3%, respectively), while treatments with 10 mg/cm2 or 50 mg/cm2 EOLS did not affect the hatching rate at all (80% and 90%, respectively). We observed an anti-feeding effect in insects fed with blood containing natural products at the higher concentrations (100 µg/mL). Finally, excretion rate was affected by EOLS and carvacrol, but not by thymol. These findings offer novel insights into basic physiological processes that make the tested natural compounds interesting candidates for new types of insecticides.

Effects of Lippia sidoides essential oil, thymol, p-cymene, myrcene and caryophyllene on rat sciatic nerve excitability

Lippia sidoides Cham is a typical herb species of Northeast Brazil with widespread use in folk medicine. The major constituents of the essential oil of L. sidoides (EOLs) are thymol, p-cymene, myrcene, and caryophyllene. Several studies have shown that the EOLs and its constituents have pharmacological effects, including antibacterial, anti-inflammatory, antioxidant and neuroprotective activity. Therefore, this work aimed to investigate the effects of the EOLs and their main constituents on rat sciatic nerve excitability. The sciatic nerves of adult Wistar rats were dissected and mounted in a moist chamber. Nerves were stimulated by square wave pulses, with an amplitude of 40 V, duration of 100 μs to 0.2 Hz. Both EOLs and thymol inhibited compound action potential (CAP) in a concentration-dependent manner. Half maximal inhibitory concentration for CAP peak-to-peak amplitude blockade were 67.85 and 40 µg/mL for EOLs and thymol, respectively. CAP peak-to-peak amplitude was significantly reduced by concentrations ≥60 µg/mL for EOLs and ≥30 µg/mL for thymol. EOLs and thymol in the concentration of 60 µg/mL significantly increased chronaxie and rheobase. The conduction velocities of 1st and 2nd CAP components were also concentration-dependently reduced by EOLs and thymol in the range of 30-100 µg/mL. Differently from EOLs and thymol, p-cymene, myrcene and caryophyllene did not reduce CAP in the higher concentrations of 10 mM. These data demonstrated that EOLs and thymol inhibited neuronal excitability and were promising agents for the development of new drugs for therapeutic use.

Development of standardized extractive solution from Lippia sidoides by factorial design and their redox active profile

AbstractThe aim of this study was to evaluate the influences of variables of preparation on total flavonoids content from extractive solution of Lippia sidoides Cham., Verbenaceae. Thus a 23 factorial design was used to study the importance of plant proportion, the extraction method and solvent on the extraction of flavonoid. The methodology of determination of chemicals in factorial design was validated according to the parameters required by Brazilian Health Agency. The extraction solution was selected through a full factorial design where the best conditions to achieve the highest content of flavonoids were: 7.5% (w/v) of plant with ethanol 50% (v/v) as solvent. The polyphenols content was determined by LC method and its relationship with the antioxidant and free radical scavenging activities was evaluated. The free radical scavenging activities and antioxidant potentials were determined for different concentrations using various in vitro models. Our results indicate that extracts exhibited a significant dose-dependent antioxidant effect as evaluated by TRAP/TAR assays. Besides, we observed an antioxidant activity against hydroxyl radicals and nitric oxide, and protection against lipid peroxidation in vitro. Our results suggest that the extract presents significant in vitro antioxidant potential indicating promising perspectives for its use as pharmaceutical/or food additive.

Análise fitoquímica e atividade antifúngica do óleo essencial de folhas de Lippia sidoides Cham. e do Timol contra cepas de Candida spp / Phytochemical analysis and antifungal activity of the essential oil of Lippia sidoides Cham. and of the Thymol against Candida strains

RESUMO A resistência de fungos do gênero Candida aos fármacos químicos tem lançado o desafio de se identificar novas substâncias que possuam atividade antibiótica ou venham a modular o efeito de produtos atualmente usados contra candidíase. O presente estudo avaliou a atividade antifúngica do óleo essencial de Lippia sidoides Cham. e do timol, sobre cepas de Candida. Inicialmente os produtos foram testados frente a 16 cepas fúngicas pela técnica de difusão em meio sólido, o que permitiu selecionar linhagens para continuidade da pesquisa. Com as linhagens de Candida krusei (CK LMBM 01, CK LMBM 02), Candida albicans (CA LM 62) e Candida tropicalis (CT LM 20), procedeu-se, por microdiluição em caldo, a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e em meio sólido, a Concentração Fungicida Mínima (CFM) dos produtos foi identificada. O microcultivo das leveduras em meio empobrecido foi realizado para verificação de alterações morfológicas e, além disso, uma análise da composição química do óleo foi realizada por Cromatografia Gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM). Nesta análise, o constituinte majoritário foi o timol (84,95%), seguido de compostos como p-cimeno e Éter metil carvacrol, entre outros. A CIM do óleo essencial de Lippia sidoides Cham. frente às cepas variou entre 64 e 256 μg/mL, enquanto a CIM do timol foi estabelecida entre 32 e 64 μg/mL. A CFM do óleo essencial foi determinada entre 128 e 512 μg/mL e para o timol foram encontrados valores entre 64 e 128 μg/mL. Em relação à análise micromorfológica, verificada nas concentrações de CIM e CIM x 2, o óleo essencial inibiu o dimorfismo das cepas CK 01 e CT 20 na CIM e quando foi ensaiado o timol, este, na CIM, impediu a transição morfológica das cepas CK 01 e CA 62. Uma redução da morfogênese também foi obsevada na cepa CT 20, porém apenas em CIM x 2 e de forma mais discreta. Os resultados enaltecem o potencial antifúngico de L. sidoides e de seu composto majoritário timol tanto no combate à Candida quanto na neutralização de um dos fatores de virulência, a capacidade invasiva por formação de hifas e pseudohifas verificado na condição patogênica da candidíase. Estes dados são promissores e poderão incentivar futuras pesquisas sobre os aspectos fitoquímicos, toxicológicos e farmacológicos tanto do óleo essencial de Lippia sidoides como também de seus componentes químicos.

ABSTRACT The resistance of the Candida against drugs has been a challenge to the discovery of new substances with antimicrobial or modulatory effects that could be used against the cadidiasis. This work evaluated the antifungal activity of the essential oil of Lippia sidoides Cham. and of the Thymol against Candida strains. The products were tested towards 16 strains of Candida using the diffusion method, which allowed to select the strains in order to proceed with the research. The strains of Candida krusei (CK LMBM 01, CK LMBM 02), Candida albicans (CA LM 62) and Candida tropicalis (CT LM 20) were assayed by the microdilution method so that the Minimal Inhibitory Concentration (MIC) and the Minimal Fungicide Concentration (MFC) could be determined. The morphogenesis of the Candida was evaluated using poor environment in order to observe morphological changes. The composition of the essential oil was determined by GC-MS. The main compound observed was the thymol (84.95%). The MIC of the essential oil of L. sidoides and Thymol ranged between 64 to 256 μg/mL, and between 32 to 64 μg/mL respectively. The MFC of the essential oil and the thymol varied between 128 to 512 μg/mL and 64 to 128 μg/mL respectively. The morphogenesis of different Candida strains was inhibited in the MIC and MICx2 to the essential oil and thymol. The results indicated the antifungal potential of the L. sidoides and of the Thymol due to the inhibition of the invasive capacity, one of the most important virulence factors for the candidiasis` development. These results are promising to new researches about the phytochemical, toxicological and pharmacological aspects of the essential oil of L. sidoides and its phytochemical compounds.

Allelopathic effect of essential oils of medicinal plants in Bidens pilosa L / Efeito Alelopático de oleos essencias de plantas medicinais em Bidens pilosa L

We determined the inhibitory allelopathic effects of the volatile extracts of Cinnamomum zeylanicum Ness, Lippia sidoides Cham. and Cymbopogum nardus L. on seed germination and root growth of seedlings of Bidens pilosa. The experiment was conducted at the Seed Analysis Laboratory of the Department of Plant Science, Federal University of Ceará. For this end, we used oils at the concentrations of 0.01, 0.02, 0.04 and 0.08% (v/v). Five treatments were used for each of the oils arranged in a completely randomized design with four replications of 25 seeds. The seeds were sown in Petri dishes lined with filter paper moistened with distilled water and, aiming at the indirect contact with each oil, two sheets of filter paper were placed on top of the lid, in which three (3) mL of each oil solution were added. Then, the dishes were incubated in a germination chamber at 25°C. The pH did not contribute to alter the results; the volatile extracts of essential oils of C. zeylanicum, L. sidoides and C. nardus inhibited seed germination and root growth of seedlings of B. pilosa, which shows allelopathic potential; and the concentration of 0.08% of oils caused the overall deterioration of the roots and death of seedlings of B. pilosa.

Determinou-se o efeito alelopático inibitório dos extratos voláteis de Cinnamomum zeylanicum Ness, Lippia sidoides Cham. e Cymbopogum nardus L., sobre a germinação de sementes e o crescimento de raiz de plântulas de Bidens pilosa. O experimento foi conduzido no Laboratório de Análises de Sementes do Departamento de Fitotecnia da Universidade Federal do Ceará. Para isso, utilizaram-se óleos essenciais nas concentrações 0,01, 0,02, 0,04 e 0,08%. (v/v). Foram utilizados cinco tratamentos para cada óleo dispostos em delineamento inteiramente casualizado com quatro repetições de 25 sementes. As sementes foram semeadas em placas de Petri forradas com papel de filtro umedecido com água destilada e, visando o contato indireto com cada óleo, foram colocadas duas folhas de papel de filtro na parte superior interna da tampa, onde foi adicionado 3(três) mL da solução de cada óleo. Em seguida, as placas foram incubadas em câmara de germinação a 25ºC. O pH não contribuiu para alterar os resultados; os extratos voláteis de óleos essenciais de C. zeylanicum, L. sidoides and C. nardus inibiram a germinação de sementes e o crescimento da raiz de plântulas de B. pilosa, evidenciando potencial alelopático; a concentração de 0,08% dos óleos causaram a deterioração total das raízes e morte das plântulas de B. pilosa.

Anesthetic activity of Brazilian native plants in silver catfish (Rhamdia quelen)

There is an increasing demand for inexpensive and safe anesthetics that can reduce fish stress caused by some procedures such as capture and handling. In this context, the present study evaluated the potential of essential oils (EO) of three Brazilian native plants (Hesperozygis ringens, Lippia sidoides and Ocotea acutifolia) as anesthetics for the silver catfish - Rhamdia quelen. Moreover, an analysis was made of the chemical composition of these oils and their influence on stress parameter. EO of H. ringens and O. acutifolia were effective as anesthetics, without behavioral side effects. EO of O. acutifolia (150 µL L-1) promoted an increase in blood glucose level. Regarding to the composition, pulegone accounts for 96.63% of the EO of H. ringens, and caryophyllene oxide amounts to 56.90% of the EO of O. acutifolia. Two chemotypes, thymol and carvacrol (68.40% and 67.89%, respectively) were verified for EO of L. sidoides. Both samples of EO of L. sidoides showed anesthetic activity in silver catfish, but exposure also caused loss of mucus and mortality. Thus, only the EO of H. ringens and O. acutifolia are advised for anesthetic use.

Existe uma crescente demanda por anestésicos baratos e seguros capazes de reduzir o estresse em peixes produzido durante procedimentos como captura e manuseio. Neste contexto, o presente estudo avaliou o potencial como anestésico dos óleos essenciais (EO) de três espécies vegetais nativas (Hesperozygis ringens, Lippia sidoides e Ocotea acutifolia) em jundiás - Rhamdia quelen. Adicionalmente, a composição química desses óleos e suas influências sobre o estresse também foram avaliadas. Os EO de H. ringens e O. acutifolia foram efetivos como anestésicos sem efeitos adversos detectáveis. EO de O. acutifolia (150 µL L-1) promoveu um aumento na glicemia. Em relação a sua composição, pulegona correspondeu a 96,63% do EO de H. ringens, e óxido de cariofileno a 56,90% do EO de O. acutifolia. Dois quimiotipos, timol e carvacrol (68,40% e 67,89%, respectivamente) foram verificados para os EO de L. sidoides. Ambas as amostras de EO de L. sidoides apresentaram atividade anestésica em jundiás, contudo a exposição produziu perda de muco e mortalidade. Desta forma, somente os EO de H. ringens e O. acutifolia têm seu uso recomendável como anestésicos.

The anti-adherence effect of Lippia sidoides Cham: extract against microorganisms of dental biofilm / Efeito anti-aderente de Lippia sidoides: extrato contra microorganismos do biofilme dental

Most illnesses affecting the oral cavity are proven to have infectious origin. Several categories of chemical agents have been used in the chemical control of dental biofilm through strategies that aim at reducing bacterial adhesion and inhibiting the growth and the proliferation of microorganisms on the tooth surface. The use of plants in folk medicine and in Dentistry, as well as the spread of successful cases, has led to scientific exploration, resulting in chemical-pharmacological knowledge of thousands of plants. The present study aimed to evaluate the anti-adherence activity of Lippia sidoides Cham., comparing the results with those of 0.12% chlorhexidine by means of an in vitro simulation of dental biofilm. The studied bacterial strains were Streptococcus mutans, Streptococcus sanguinis and Lactobacillus casei, main responsible for the biofilm adherence. The studied extract was effective in inhibiting the adherence of Streptococcus mutans up to a concentration of 1:16, compared to Chlorhexidine. Lippia sidoides Cham extract showed anti-adherence effect on the major microorganisms responsible for dental biofilm consolidation.

É fato comprovado que a maior parte das doenças que acometem a cavidade bucal são de origem infecciosa. Várias categorias de agentes químicos têm sido utilizadas no controle químico do biofilme dental através de estratégias que visam a redução da adesão bacteriana, a inibição do crescimento, e a proliferação dos microrganismos na superfície do dente. A utilização das plantas pela medicina popular, seu uso na Odontologia e a divulgação dos êxitos, conduziram a exploração científica resultando no conhecimento químico-farmacológico de milhares de plantas. A presente pesquisa objetivou avaliar a atividade antiaderente da folha da Lippia sidoides Cham. comparando seus resultados com a Clorexidina 0,12%, através de uma simulação, in vitro, do biofilme dental. As linhagens bacterianas utilizadas na pesquisa foram o Streptococcus mutans, Streptococcus sanguinis, e o Lactobacillus casaram, principais responsáveis pela aderência do biofilme. O extrato estudado mostrou-se efetivo na inibição de aderência das bactérias ensaiadas até uma concentração de 1:16, sobre o Streptococcus mutans, sendo comparável à Clorexidina. O extrato da Lippia sidoides Cham. demonstrou efeito antiederente, sobre os principais microrganismos responsáveis pela consolidação do biofilme dental.

Teor de óleo essencial de alecrim-pimenta em função do horário de colheita / Essential oil content of pepper-rosmarin as a function of harvest time

O alecrim-pimenta é uma importante planta medicinal, nativa do nordeste brasileiro, que, devido ao seu óleo essencial, apresenta grande potencial antifúngico e antibacteriano. Um dos fatores que afetam o teor de metabólitos secundários das plantas é o horário de colheita, assim, o conhecimento desse fator subsidia as decisões agronômicas da espécie, favorecendo o aumento do teor de óleo essencial no momento da colheita. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do horário de colheita na produção de óleo essencial de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.). O experimento foi desenvolvido no Instituto de Ciências Agrárias da Universidade Federal de Minas Gerais (ICA/UFMG), Montes Claros, Minas Gerais, Brasil. Utilizou-se o delineamento experimental em blocos casualizados com cinco tratamentos, definidos pelos horários de coleta das folhas (6:00, 9:00, 12:00, 15:00 e 18:00) e seis repetições, sendo esse o número de coletas em cada tratamento. As folhas foram obtidas de plantas matrizes do Horto Medicinal do ICA/UFMG. O óleo essencial foi obtido pelo método de hidrodestilação usando o aparelho de Clevenger. A análise de regressão apresentou um efeito cúbico para o teor de óleo essencial, sendo que o maior valor, 5,78 por cento em relação à matéria seca, foi obtido às 9h59min. Portanto, recomenda-se a colheita das folhas de alecrim-pimenta próximo das 10h.

The pepper-rosmarin is an important medicinal plant, native of Northeast of Brazil, that, because of its essential oil, presents great antifungal and antibacterial potential. One of the factors that affect the secondary metabolites content of plants is the harvest time, thus, the knowledge of this factor subsidizes the decisions agronomic species, favoring the increase of essential oil content at the harvest moment. Thus, the aim of this research was to evaluate the effect of harvest time on the essential oil production of pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham.). The experiment was carried out in the Instituto of Ciências Agrárias of Universidade Federal of Minas Gerais (ICA/UFMG), Montes Claros, Minas Gerais, Brazil. It was installed in a randomized block design, with five treatments consisted by harvest times (6:00, 9:00, 12:00, 15:00 and 18:00) with six replications (number of collections in each treatment). The leaves were obtained from stock plants of medicinal vegetable garden of ICA/ UFMG. The essential oil was obtained by hydrodistillation in a Clevenger apparatus. The regression analysis presented a cubic effect to the essential oil content, being that the highest value, 5,78 percent in relation to dry matter, was obtained at 9h59min. Therefore, it was recommended the harvest time of pepper-rosmarin leaves next to 10h.

Produção de fitomassa e teor de óleo essencial de folhas de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham. ) em diferentes espaçamentos de plantio / Phytomass production and essential oil yield of pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham. ) leaves in different planting spacings

O alecrim-pimenta, espécie nativa do nordeste brasileiro, é uma planta medicinal de porte arbustivo, com folhas aromáticas, que possuem óleo essencial rico em timol e carvacrol. Essas substâncias conferem grande importância à planta, uma vez que apresentam atividades farmacológicas comprovadas cientificamente. Desta forma, o estudo das condições de cultivo da espécie é essencial para obtenção de maiores produtividades. O espaçamento entre plantas destaca-se como um dos fatores mais importantes relativos ao cultivo, de forma que a produtividade e o rendimento da cultura são afetados pela densidade de plantas. Dada a necessidade de otimizar técnicas de cultivo do alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), objetivou-se avaliar a produção de fitomassa e óleo essencial em quatro espaçamentos de plantio. O trabalho foi realizado em campo, no Instituto de Ciências Agrárias da Universidade Federal de Minas Gerais (ICA/UFMG), no município de Montes Claros/MG. Utilizou-se o delineamento em blocos casualizados, com quatro tratamentos e cinco repetições. Os tratamentos foram definidos pelos espaçamentos de plantio: 1,0 x 0,5 m; 1,0 x 1,0 m; 1,5 x 1,0 m; e fileiras duplas (1,0 x 0,8 x 0,5m), sendo 1,0 m entre fileiras duplas, 0,8 m entre fileiras simples e 0,5 m entre plantas na fileira. Após 150 dias do plantio no campo, foram avaliadas as variáveis produção de fitomassa fresca e seca das folhas, a produção e o teor de óleo essencial. Observou-se que o espaçamento de 1,0 x 0,5 m possibilitou uma maior produção de fitomassa e de óleo essencial, sendo, portanto, o mais indicado para o cultivo do alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.).

Native to Northeastern Brazil, pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham.) is a shrubby medicinal plant with aromatic leaves and essential oil rich in thymol and carvacrol. These components have great importance to the species since they present scientifically proven pharmacological activities. Thus, the study of cultivation conditions for this species is essential to obtain higher productivity. Spacing between plants is one of the most important factors related to cultivation, since crop productivity and yield are affected by plant density. Based on the need of optimizing pepper-rosmarin cultivation techniques, this work aimed to evaluate the phytomass production and the essential oil yield in four planting spacings. The experiment was carried out under field conditions in the Agricultural Sciences Institute, Federal University of Minas Gerais (ICA/UFMG), Montes Claros Municipality, Minas Gerais State, Brazil. Experimental design was in randomized blocks, with four treatments and five replicates. Treatments consisted of the planting spacings 1.0 x 0.5 m; 1.0 x 1.0 m; 1.5 x 1.0 m; and double rows (1.0 x 0.8 x 0.5 m), with 1.0m between double rows, 0.8m between single rows and 0.5m between plants in the row. After 150 days of planting in the field, leaf fresh and dry phytomass production and essential oil yield were evaluated. The spacing 1.0 x 0.5 m led to higher phytomass production and essential oil yield, being therefore the most recommended for pepper-rosmarin cultivation.

Antimicrobial activity of Lippia sidoides Cham. (Verbenaceae) essential oil against Staphylococcus aureus and Escherichia coli / Atividade antimicrobiana do óleo essencial de Lippia sidoides Cham. (Verbenaceae) contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli

The antibacterial effect of Lippia sidoides (rosemary pepper) essential oil was tested against the bacteria Staphylococcus aureus and Escherichia coli isolated from homemade Minas cheese produced in Brazil. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) determined in the Dilution Test was 13 µL oil mL-1 for both bacteria, which characterizes inhibitory action in broth for a 24-hour interaction period. The Minimum Bactericidal Concentration (MBC) determined in the Suspension Test, with one minute of contact, was 25 µL oil mL-1 for both tested bacteria, obtaining at this concentration a bactericidal effect of 99.9 percent on the viable bacterial cells from each sample. Results demonstrated the bacterial activity of Lippia sidoides essential oil against S. aureus and E. coli, suggesting its use as an antibacterial agent in foods.

O efeito antibacteriano do óleo essencial da Lippia sidoides (alecrim-pimenta) foi testado contra as bactérias Staphylococcus aureus e Escherichia coli isoladas de queijo minas artesanal, produzido no Brasil. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) determinada por Teste de Diluição foi de 13 µL de óleo mL-1 para as duas bactérias, o que caracteriza ação inibitória em caldo durante vinte quatro horas de interação. A Concentração Bactericida Mínima (CBM) determinada através de Teste de Suspensão, com um minuto de contato, foi de 25 µL de óleo mL-1 para ambas as bactérias testadas, obtendo-se a esta concentração o efeito bactericida de 99,9 por cento sobre as células bacterianas viáveis em cada uma das amostras. Os resultados demonstraram atividade bactericida do óleo essencial de Lippia sidoides contra S. aureus e E. coli, sugerindo a possibilidade do uso como agente antibacteriano em alimentos.

Prolina livre em alecrim-pimenta sob estresse hídrico antes da colheita / Free proline in Lippia sidoides Cham. under water stress before harvest

O estresse hídrico é considerado um dos fatores limitantes para o desenvolvimento das plantas, com isso, os vegetais desenvolvem mecanismos para tolerar a deficiência hídrica do solo. Entre esses mecanismos, está o acúmulo de prolina livre nos tecidos, tendo como função a regulação osmótica dos tecidos. A influência do estresse hídrico em plantas medicinais ainda é pouco estudado, principalmente em plantas nativas, como é o caso do alecrim-pimenta Lippia sidoides Cham. Assim, o trabalho teve por objetivo avaliar a prolina livre e o teor de flavonoides totais na referida espécie sob condições de estresse hídrico antes da colheita. O trabalho foi realizado no Instituto de Ciências Agrárias da UFMG, Campus Montes Claros, delineamento em blocos casualizados, com 5 tratamentos e 4 repetições, sendo eles 8, 6, 4, 2 e 0 dias de supressão da irrigação antes da colheita. Os teores encontrados de prolina variaram entre 0,2489 a 3,2421 ìM.g-1 de matéria seca e de flavonoides entre 0,0139 a 0,008 g.g-1. Os resultados observados indicam que a planta diminui seu teor de flavonoides e aumenta o teor de prolina com o aumento do período de estresse.

Water stress is considered a limiting factor for plant growth, thus, the plants develop mechanisms to tolerate the soil water deficit. Among these mechanisms is the accumulation of free proline in tissues, with the poke the osmotic regulation of tissues. The influence of water stress in medicinal plants is still poorly studied, mainly on native plants such as rosemary-pepper Lippia sidoides Cham. Thus, the study aimed to evaluate the free proline and total flavonoid content in that species under conditions of water stress before harvest. The study was conducted at the Institute of Agricultural Sciences, UFMG, Campus Montes Claros, randomized block design with 5 treatments and 4 replicates, and they 8, 6, 4, 2 and 0 days of withholding irrigation before harvest. The content of proline ranged from 0.2489 to 3.2421 ìM.g-1 of dry matter and flavonoids from 0.0139 to 0.008 gg-1. The results indicate that the plant reduces its content of flavonoids and proline content increases with increasing stress time.

Avaliação in vitro da atividade antimicrobiana do extrato da Lippia sidoides Cham. sobre isolados biológicos de Staphylococcus aureus / In vitro evaluation of the antimicrobial activity of Lippia sidoides Cham. extract on biological isolates of Staphylococcus aureus

Staphylococus aureus apresenta-se como microrganismo patogênico clássico sendo comumente reconhecido como agente etiológico de infecções hospitalares e comunitárias. Através do conhecimento das propriedades biológicas da Lippia sidoides Cham., conhecida como alecrim-pimenta, esta pesquisa teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana in vitro do extrato metanólico desta planta em inibir o crescimento de isolados biológicos de S. aureus de origem humana hospitalar. Utilizou-se o método de difusão em Agar Muller Hinton para se determinar a Concentração Inibitória Mínima do extrato. A atividade anti-estafilococica do extrato da Lippia sidoides Cham. foi observada pela formação de halos de inibição do crescimento bacteriano (9 a 27 mm), todas as amostras ensaiadas mostraram-se sensíveis à ação do extrato da Lippia sidoides Cham. até a diluição de 1:16 (0,053 g mL-1). Nas condições desse estudo, esses resultados mostram promissora atividade antibacteriana do extrato de Lippia sidoides Cham.

Staphylococcus aureus is a classic pathogenic microorganism commonly recognized as etiological agent of community and nosocomial infections. Considering the knowledge of Lippia sidoides Cham. (Alecrim-pimenta) biological properties, this study aimed to evaluate in vitro the antimicrobial activity of the extract from this plant in inhibiting the growth of S. aureus from hospitalized humans. The Agar Mueller-Hinton diffusion method was used to determine the Minimum Inhibition Concentration of the extract. The anti-Staphylococcus aureus activity of Lippia sidoides Cham. extract was noted by the large growth inhibition zones (9 to 27 mm); all tested samples were sensitive to the action of Lippia sidoides Cham. extract until the dilution of 1:16 (0.053 g mL-1). Under the conditions adopted in the present study, these results show the promising anti-staphylococcal property of Lippia sidoides Cham. extract.

Toxicidade aguda dos extratos hidroalcoólicos das folhas de alecrim-pimenta, aroeira e barbatimão e do farelo da casca de pequi administrados por via intraperitoneal / Acute toxicity of leaf hydroalcoholic extracts of Lippia sidoides, Myracroduon urundeuva, Stryphnodendron adstringens and of Caryocar brasilliense administered by intraperitoneal route

O estudo objetivou realizar ensaio toxicológico pré-clínico inicial para investigar a toxicidade das folhas de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), aroeira (Myracrodruon urundeuva Fr. All.) e barbatimão [Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville] e do farelo da casca de pequi (Caryocar brasiliense Camb.), por meio da determinação da dose letal 50 por cento (DL50). Na investigação da DL50, foram utilizados grupos de camundongos Swiss de mesmo sexo (n=150, sendo 30 animais por tratamento) inoculados, por via intraperitoneal, com diluições seriadas do extrato hidroalcoólico das folhas de alecrim, aroeira e barbatimão e do farelo da casca de pequi. Após a inoculação, os animais foram observados por um período de 14 dias, para determinar a quantidade de mortos, doentes e sobreviventes. O estudo toxicológico pré-clínico agudo demonstrou, em camundongos por via intraperitoneal, toxicidade igual a 0,31mg mL-1 DL50 mL-1 para todas as plantas, exceto para o barbatimão, que apresentou toxicidade igual a 0,25mg mL-1. Pesquisas devem ser realizadas visando a obter dados de toxicidade das plantas em outras vias para assegurar o uso em saúde humana e animal.

This study aimed to conductpre-clinical toxicology testing to investigate the toxicity of Lippia sidoides Cham., Myracrodruon urundeuva Fr. All., Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville and Caryocar brasiliense Camb., by determining the 50 percent (LDL50) lethal dose. In the investigation of the LD50, groups of Swiss mice of the same sex were used (n=150; 30 animals per plant and all inoculated intraperitoneally with serial dilutions of the aqueous fraction obtained from the leaves of plants. After inoculation, the animals were observed along a period of 14 days in order to observe the dead, sick and survivors rate. In mice inoculated intraperitoneally, the acute pre-clinical toxicology testing demonstrated toxicity equal to 0,31mg mL-1 LD50 mL-1 for all plants. The exception was for Stryphnodendron adstringens, which presented toxicity equal to a 0,25mg mL-1DL50 mL-1 and values expressed in terms of dilution. Research should be conducted to obtain data on toxicity of the plants in other ways to ensure the use in human and animal health. Therefore, the studied plants should be used with caution. They present a relatively mild toxic potential, but it may be harmful to users if they are not properly utilized.

Comprimento da estaca no desenvolvimento de mudas de alecrim-pimenta / Effect of cutting length on the development of pepper-rosmarin seedlings

O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do comprimento de estacas caulinares no desenvolvimento de mudas de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.). As estacas foram coletadas de plantas matrizes do Horto Medicinal do Instituto de Ciências Agrárias da Universidade Federal de Minas Gerais, em Montes Claros, Minas Gerais. O experimento foi conduzido em casa de vegetação com nebulização intermitente. Utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado, com quatro tratamentos e cinco repetições. Os tratamentos foram definidos pelos intervalos de comprimento das estacas (5 a 8cm, 8,1 a 11cm, 11,1 a 14cm e 14,1 a 17cm). Foram avaliados o número de raízes principais, o comprimento da maior raiz (cm), o número de brotações, a porcentagem de enraizamento, a avaliação visual do enraizamento e a fitomassa seca das brotações e das raízes (g). Os resultados indicam que o comprimento das estacas afeta o desenvolvimento de mudas de alecrim-pimenta, especialmente a fitomassa seca das brotações e das raízes. As estacas com 14,1 a 17cm apresentaram a maior porcentagem de enraizamento e as maiores médias para as outras variáveis analisadas, sendo, portanto, mais recomendadas para a propagação vegetativa de alecrim-pimenta.

This research aimed to evaluate the effect of shoot cutting length on the development of pepper-rosmarin seedlings (Lippia sidoides Cham.). The cuttings were obtained from stock plants of the medicinal vegetable garden of Instituto de Ciências Agrárias/UFMG, Montes Claros, Minas Gerais, Brazil. The experiment was conducted in greenhouse conditions with intermittent mist. The experimental design was totally randomized with four treatments consisted of different size intervals (5 to 8cm, 8.1 to 11cm, 11.1 to 14cm and 14.1 to 17cm), with five replications each. The amount of shooting and root, the shooting and root dry weight (g), the the longest root length (cm), the visual rooting evaluation and the rooting percentage were analysed. The results indicated that cutting length affects the development of pepper-rosmarin seedlings, especially shooting and root dry weight. The cuttings with 14.1 until 17cm presented the highest percentage of rooting and the largest average of the other variables, being the most recommended to be used in the propagation of pepper-rosmarin.

Antimicrobial activity of the essential oil from Lippia sidoides, carvacrol and thymol against oral pathogens

Dental caries and periodontal disease are associated with oral pathogens. Several plant derivatives have been evaluated with respect to their antimicrobial effects against such pathogenic microorganisms. Lippia sidoides Cham (Verbenaceae), popularly known as "Alecrim-pimenta" is a typical shrub commonly found in the Northeast of Brazil. Many plant species belonging to the genus Lippia yield very fragrant essential oils of potential economic value which are used by the industry for the commercial production of perfumes, creams, lotions, and deodorants. Since the leaves of L. sidoides are also extensively used in popular medicine for the treatment of skin wounds and cuts, the objective of the present study was to evaluate the composition and antimicrobial activity of L. sidoides essential oil. The essential oil was obtained by hydro-distillation and analyzed by GC-MS. Twelve compounds were characterized, having as major constituents thymol (56.7 percent) and carvacrol (16.7 percent). The antimicrobial activity of the oil and the major components was tested against cariogenic bacterial species of the genus Streptococcus as well as Candida albicans using the broth dilution and disk diffusion assays. The essential oil and its major components thymol and carvacrol exhibited potent antimicrobial activity against the organisms tested with minimum inhibitory concentrations ranging from 0.625 to 10.0 mg/mL. The most sensitive microorganisms were C. albicans and Streptococcus mutans. The essential oil of L. sidoides and its major components exert promising antimicrobial effects against oral pathogens and suggest its likely usefulness to combat oral microbial growth.

Obtenção e avaliação clínica de dentifrícios à base do extrato hidroalcoólico da Lippia sidoides Cham (Verbenaceae) sobre o biofilme dentário / Obtention and evaluation of odontologic products made with the crude extract of Lippia sidoides Cham (Verbenaceae) over the dental biofilm

Resumo: Este estudo teve por objetivo obter e avaliar os efeitos de preparações odontológica,creme dental e colutório, à base do extrato hidroalcoólico de Lippia sidoides Cham como coadjuvanteda higiene bucal no controle do biofilme dentário em voluntários humanos. Foram selecionados84 indivíduos, divididos em 4 grupos de 21 elementos, os grupos teste 2 e 3 e os grupos controle1 e 4, avaliados nos tempos 0, 7, 15, 21 e 28 dias. Os resultados demonstraram que o creme dental e o colutório, à base do extrato de Lippia sidoides Cham (grupos 2 e 3 respectivamente), após umperíodo de 28 dias, foram superiores aos produtos utilizados como controle (creme dental de usodiário no grupo 1 e solução de cloreto de cetilpiridíneo no grupo 4), mostrando serem eficientes como coadjuvante no controle do biofilme dentário, pois reduziram de forma estatisticamente significativa o índice de biofilme dentário

This work describes the attainment of odontologic preparations from the crude extract of Lippia sidoides Cham (Verbenaceae) and the evaluation of their effects as an oral hygienic agent in the dental bacterial control on human volunteers. The volunteers (84) were divided into four groups of 21 where test groups are 2 and 3 and control groups are 1 and 4, tested after time periods of 0, 7, 14, 21 and 28 days. The results suggested that the toothpaste and the mouthwash made with the crude extract of Lippia sidoides Cham (Verbenaceae) after a 28 day period were statistically efficient in reducing the dental biofilm caused by bacteria

Estudo químico-biológico dos óleos essenciais de Hyptis martiusii, Lippia sidoides e Syzigium aromaticum frente às larvas do Aedes aegypti / Chemical-biological study of the essential oils of Hyptis martiusii, Lippia sidóides and Syzigium aromaticum against larvae of Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus

O interesse pelos bioensaios frente à larvas de Aedes aegypti e Culex quinquefasciatus deve-se ao fato de que estas espécies estão distribuídas por todo o território nacional, sendo portanto uma atividade realizada por inúmeros pesquisadores do Brasil. Os óleos essenciais de Syzigium aromaticum (L.) Merr. & Perry, Lippia sidoides Cham.,e Hyptis martiusii Benth.,foram testados no combate ao transmissor da dengue e da filariose. As larvas de terceiro estádio foram expostas em triplicatas a diferentes concentrações (1000, 500, 250, 100, 50, 25 e 10 ppm). As análises foram observadas após dez minutos do início do tratamento, e mostraram resultados bastante significativos, com potencialidade de mortalidade de até 100 por cento das larvas testadas, indicando acentuados efeitos tóxicos de alguns constituintes voláteis presentes nos óleos. Para os óleos de S. aromaticum, L. sidoides e H. martiusii foram constatadas, frente à Aedes aegypti, valores respectivos de CL50 de 21,4; 19,5 e 18,5 ppm e frente ao Culex quinquefasciatus, 14,5; 16,6 e 27,5 ppm, respectivamente.

The interest for a biological assay against larvae of Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus is due to the fact that these species are distributed by the whole national territory, being therefore an activity carried out by countless researchers of Brazil. The essential oils of Syzigium aromaticum, Hyptis martiusii and Lippia sidoides were tested in the combat of the transmitter of the dengue and of the filariosis, using larvae of third stadium were exposed in triplicate to different concentrations (1000, 500, 250, 100, 50, 25 and 10 ppm). The larvicidal activity was observed after ten minutes of the beginning of the treatment, in the end showed very significant results, with mortality potentials of up to 100 percent of the tested larvae, indicating accentuated toxical effects in some representatives of the volatile compounds present in the oils. For the oils of S. aromaticum, L. sidoides and H. martiusii DL50 of 1,0; 1,0 and 8,0 ppm, respectively, were observed.